在體內,各種其他參數對傷口愈合的影響更大,例如不同細胞類型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口愈合實驗將遷移速度與所有這些其他影響分開,提供了一個客觀且可重復的實驗環境。
1、Culture-Inserts插件可以重復使用嗎?
盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓滅菌并且與酒精相容,但我們不建議重復使用。 如果您仍想嘗試重復使用,則需要建立一個用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經驗,雖然它們可能會保持粘性,但之前實驗的殘留可能會影響重現性。
2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎?
可以,您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前為止,還沒被報告與任何干燥表面不相容。
3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 µm 的傷口?
不可以,Culture-Inserts 插件中最小和標準的傷口尺寸是 500 µm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會有一個額外的中心間隙,傷口大小為 1000 µm。
4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養皿上的?
Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個粘性表面,可粘附(粘)在任何平坦、干燥、均勻的表面。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無菌鑷子按壓插件來簡單地修復它。
5、您是否曾經遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題?
只要表面干燥,我們從未遇到過讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問題。 但是,潮濕的表面會導致泄漏。 因此,請確保您的定制涂層表面*干燥。
6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個細胞才能進行細胞遷移實驗?
開始遷移實驗時,Culture-Insert 插件中的細胞層應融合。 在所有實驗中,匯合細胞層的密度應盡可能一致。 使用的接種細胞數量取決于您的細胞類型,因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說明書中找到推薦的范圍和詳細方案。
7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細胞有時會從蓋玻片上脫落?
以下是解釋細胞脫離的一些可能原因:
• 細胞密度太高。 --> 播種更少的細胞(細胞層應在 24 小時后生長至 融合,但不能過度生長)。有關傷口愈合試驗的詳細方案,請參閱:傷口愈合/細胞劃痕實驗新方法-如何劃出筆直均一的劃痕
• 細胞正在挨餓。 --> 增加每個插入孔的培養基體積,或在細胞生長期間更換培養基。
• 在極少數情況下,細胞類型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先,覆蓋蓋玻片表面以促進細胞附著。然后,在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥。
以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進細胞粘附的一些額外提示:
• 我們強烈建議提前測試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會破壞遷移間隙中的涂層。這可以通過使用針對涂層蛋白的熒光標記抗體進行分析。如果遷移間隙區域中涂層的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強烈,則可以假設在插入物移除后是保持完好的。經過幾次成功的測試后進行實際實驗通常是安全的。
• 如果去除插入物破壞了大部分涂層,則僅涂覆插件的孔,然后接種細胞。取出插件后,通過向培養基中添加低濃度涂層來填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后,用普通介質替換涂層溶液并繼續進行遷移實驗。
8、當 Culture-Insert變干燥時,包被蛋白會失去活性嗎?
這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質類型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細胞接種之間保持水分。 根據我們的經驗,當纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時,我們沒有發現對細胞遷移速度有任何影響。
9、有沒有辦法用懸液細胞進行傷口愈合實驗,或者該實驗僅適用于貼壁細胞?
目前,使用 Culture-Insert插件的傷口愈合實驗只能用于貼壁細胞。 然而,單個細胞的遷移研究可以在 µ-Slide 趨化性中通過將細胞嵌入到3D基質(例如,I 型膠原蛋白凝膠)中進行。
10、是什么使 Culture-Inserts插件在細胞接種過程中不會泄漏?
Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料,下部是非常柔軟的材料,在按下 Culture-Insert 插件后會固定在表面上。 正確插入時是不會有任何泄漏的。
11、有時很難在 Culture-Insert 插件中看到細胞層的匯合。 您有什么建議?
當使用相差顯微鏡和小孔時,例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板,空氣-水界面之間的彎月面會導致表面強烈彎曲。 這會破壞除孔中心以外的任何地方的相位對比效應。
一種解決方案是用細胞培養基*均勻地填充 Culture-Insert 的兩個孔。 通過這樣做,您可以在孔上方的介質和空氣之間創建一個平面。 請記住,這可能會導致兩孔之間的交叉污染。
12、有時,細胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況?
當細胞在 Culture-Insert插件中生長到非常高的密度時,會觀察到了這種情況。 為了減少細胞團塊,您應該在實驗開始時使用較低的細胞密度。 然而,有時細胞會粘在與細胞相容的硅膠上。 在這種情況下,我們建議較少孵育時間和/或細胞數量。
13、Culture-Insert 如何在不造成細胞損傷的情況下模擬生理傷口?
使用體外實驗時,很難以可重復的方式模擬生理傷口。 當然,來自死細胞的碎片可能在與傷口愈合相關的遷移中發揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口愈合實驗提供了可重復的、無損傷的細胞貼片。